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我定购了表皮生长因子(EGF) 100ug和碱性成纤维生长因子(bFGF) 25ug，请问如何分装，我用的终浓度是20ng/ml。希望有经验者给我一点指点，实验正在进行中，很着急。希望越详细越好。期盼各位前辈的指点。我分装过bFGF，我是用Tris配的，Tris浓度为5毫摩尔，PH值是7.6，因为你用的终浓度跟我用的10ng/ml一样，但不能完全稀释到工作液浓度，那样不能保存，用之前再可以用别的任何一种缓冲盐溶液稀释。我是这样配的：先准备若干个干净消过毒的0.5毫升EP管，用Tris（已经消过毒的,可以高温高压消毒）把生长因子配成你的终浓度的100倍，即用tris把生长因子稀释成浓度为0.1-1.0毫克每毫升。-20度保存，之后用之前再用pbs稀释，此稀释浓度可在4度保存一周 ，或者-20度保存较久的时间，但不能反复冻融，要不然会失效的。（还有一点是稀释之前要先短暂离心，没温度和转速的要求）用之前，取出一管再用PBS稀释10倍（工作浓度的10倍），如果你的6孔板每孔加2毫升的培养基，那你可以用枪吸出2微升加入（这样又稀释了10倍，达到你的工作液终浓度），剩下的放在4度保存，如暂时不用的话 ，可放在-20度保存。祝好运！楼上的方法很好，请问楼主，你是用来培养什么细胞的，是神经干细胞吗?还是别的干细胞？是间充质干细胞，不过不是用来养细胞用，是促进诱导分化用。你可以按照所购试剂的产品说明书介绍的方法配置.如bFGF(Sigma)如下: bFGF.pdf (31.04k) 我养过神经干细胞，已经在肝细胞生长因子的稀释、分装 中发过相关帖子，为了方便，我转摘过来。本人认为可以用培养基稀释细胞生长因子，且用该法稀释纤维细胞生长因子等效果不错。关于浓度问题可以根据自己的条件和需要配制。例如我购买的细胞生长因子是10ug/支装，加2ml细胞培养基稀释后，分装。即为5ng/ul。每次按每ml培养基加4ul即为20ng/ml。 分装后注意低温保存，不要反复冻融。我用miliQ的水分装，效果也很好，也很方便。我们实验室用IMDM来分装细胞因子，EGF100ug：先用100ul IMDM配成1ug/ul（-20℃保存）。再稀释100倍，配成工作液10ng/ul（4℃保存）,最后在你的体系中加入2ul即可。bFGF 的分装原则同上。实验室EGF和bFGF均买自R&D公司EGF按照产品说明书的配方稀释，10ug/ml,然后100ul分装，-20度保存，用时可直接配成终浓度20ng/ml 的50ml培养液bFGF则是用LDMEM稀释，5ug/ml, 200ul分装，-20度保存，用时可直接配成终浓度20ng/ml 的50ml培养液我用的是Peprote的10微克的FGF-basic,试剂公司没有给我说明书，我直接溶于LDMEM制成1微克/毫升，没有用tris等先溶，不知我这种方法是否可以将FGF-basic溶解？望各位前辈给我指点及补救办法zhuxi君。请问你购买的10ug/支装生长因子，是粉剂还是液体装？我上次是直接在粉剂装中用lLDMEM溶解的，不知此法是否能将fgf-basic溶解？我是新手，请不令指教请问大鼠MSC诱导分化一定要用大鼠的生长因子吗？前两天好像有人问过bFGF的配制，你的bFGF是液体，EGF是固体，对吧？（我们的包装好像跟你的完全一样）我们的做法是：1 0.06055克Tris，用250ul三蒸水溶解，加43ul浓盐酸，再用三蒸水补足到100ml,即为5mMTris(测pH=7.6)2 用针状滤器过滤3 bFGF离心，加入250ul配好的Tris4 混匀，离心（不需再过滤，以防有效成分吸附在滤膜上）5 分装（用EP管装，每管20ul,可配100ml培养液），-20度保存，每次用时拿一管出来。注意不要反复冻融EGF我们现在也没有开始配制，我们的想法是：(大家帮我们看看是不是可行）1 称出每100ml培养液中所需EGF的量2ug(不知道电子称能不能精确到ug?)2 分别装进50个EP管中，每管加上培养液100ul3 混匀，离心4 -20度保存，每次用时拿出一管来请高手们帮着参谋参谋，谢谢！ 用PBS配成 100X的 20微升/EP管,-20保存,每次100mL培养液加一只,bFGF和EGF在4度尽量别超过一周.请问 用噬菌体展示肽库来筛选aFGF的结合肽，aFGF的浓度为多少适宜？谢谢很好,十分有用,谢谢!请问 用噬菌体展示肽库来筛选aFGF的结合肽，aFGF的浓度为多少适宜？谢谢请问各位大虾：我用10％的DMEM/F12来溶bFGF粉剂，这种做法行吗？hongmeidu wrote:前两天好像有人问过bFGF的配制，你的bFGF是液体，EGF是固体，对吧？（我们的包装好像跟你的完全一样）我们的做法是：1 0.06055克Tris，用250ul三蒸水溶解，加43ul浓盐酸，再用三蒸水补足到100ml,即为5mMTris(测pH=7.6)2 用针状滤器过滤3 bFGF离心，加入250ul配好的Tris4 混匀，离心（不需再过滤，以防有效成分吸附在滤膜上）5 分装（用EP管装，每管20ul,可配100ml培养液），-20度保存，每次用时拿一管出来。注意不要反复冻融EGF我们现在也没有开始配制，我们的想法是：(大家帮我们看看是不是可行）1 称出每100ml培养液中所需EGF的量2ug(不知道电子称能不能精确到ug?)2 分别装进50个EP管中，每管加上培养液100ul3 混匀，离心4 -20度保存，每次用时拿出一管来请高手们帮着参谋参谋，谢谢！ 请问hongmeidu:你用的是那个厂家的tris，做分子实验用的tris可以代替细胞培养用的tris吗？另外，浓盐酸的浓度是多少？我们这里有一瓶上面标着34-37%？因子的配置尽量按照说明书进行，因为不同因子之制成冻干粉时用的试剂不同。
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